Diego – A sorozat főhőse. Állatvédő és egyben felfedező is.
Alicia – Diego 12 éves nővére, aki szintén állatvédő, mint Diego.
Dóra – Diego unokatestvére, aki pár epizódban feltűnik, hogy segítsen a mentőakció során.
Csizi – Dóra barátja, aki egyedül csak a "Linda, a láma megmenti a karnevált" című epizódban tűnik fel mellékszereplőként.
A Bobo fivérek – Két majom, akik állandóan bajt okoznak Diego mentőakciója során.
Bébi jaguár – Diego legkedveltebb állata.
Klikk, a fényképezőgép – Ő fényképezi le azokat az állatokat, amiket Diegonak meg kell menteni.
Diego életmentő hátizsákja – Bármivé átalakul és beszélni is tud. Csak akkor nyílik ki, ha azt mondjuk neki, hogy "Activate!".
Dóra hátizsákja – Minden hasznos dolog megtalálható benne, amire szükség van (esetenként) a mentőakció során. Ő is tud beszélni és csak akkor nyílik ki, ha azt mondjuk neki, hogy "Hátizsák!".
Térkép – Segít a mentőakció útvonalát feltérképezni.
Amerikai Egyesült Államok
Nickelodeon, Nick Jr.
